猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光定量PCR方法的建立与应用

作者：刘婉宁; 李世念; 倪民婷; 苏霖; 师庆伟; 王金涛^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (19): 80-85.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.11.0043

• 猪瘟病毒
• 非洲猪瘟病毒
• 双重荧光定量PCR
• TaqMan探针
• 检测

为了建立能够猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)双重荧光定量PCR方法，试验比对了CSFV与ASFV的基因组序列，针对CSFV 5′-UTR和ASFV B646L保守靶序列，分别设计2条特异性引物及1条TaqMan探针，通过优化扩增体系和程序，建立可同时检测CSFV和ASFV的双重荧光定量PCR方法，并建立该方法的标准曲线，同时用敏感性试验、特异性试验和重复性试验对该方法进行评价，最后检验该方法的应用效果。结果表明：CSFV和ASFV标准曲线的相关系数(R2)分别为0.999和1,线性关系良好；CSFV与ASFV的最低检测浓度分别为1.3×100 copies/μL和2.4×100 copies/μL;与其他常见猪只病原检测无交叉反应；批间与批内变异系数均小于2%,稳定性良好。试验建立的方法对44份临床样本的检测结果与《猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 27540—2011)和《非洲猪瘟诊断技术》(GB/T 18648—2020)检测结果一致。说明试验建立的双重荧光定量PCR方法敏感、特异、稳定，可用于CSFV和ASFV的快速检测和鉴别诊断。

• 单位
  黑龙江省农垦科学院; 动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学