散寒活血祛白方及其拆方通过TLRs信号转导通路影响氧化压力下黑素细胞损伤的研究

作者：欧柏生; 李雨晴; 邓玉霞; 黄敏敏

来源：时珍国医国药, 2018, 29(09): 2124-2130.

• 白癜风
• 过氧化氢
• 黑素细胞
• 氧化应激
• Toll样受体

目的观察散寒活血祛白方及其拆方通过TLRs信号转导通路影响氧化压力下黑素细胞损伤,探讨其抗氧化损伤的保护机制。方法以500 nmol/ml过氧化氢(H2O2)诱导PIG1,A375细胞处于氧化应激状态,建立细胞氧化损伤模型。实验分组为细胞组、H2O2模型组、散寒活血祛白方全方组、散寒活血祛白方拆方组(即养血活血组、散寒温阳组、补益肝肾组)、白癜风胶囊组,各给药组加入相应药物培养,其中A375细胞给药终浓度为32 mg/ml,PIG1细胞给药终浓度为4mg/ml。除细胞组外,其余组均加入500 nmol/ml过氧化氢。CCK8检测细胞活性,RT-PCR检测TLR3,TLR9,Keratin14,ASO2及细胞趋化因子CCL2,CCL3,CCL5的基因表达,Western blot检测TLRs信号通路的表达变化,ELISA检测胞内IL6,IL8,CCL2,CCL3,CCL5蛋白的表达,流式检测胞内活性氧簇(ROS)含量,Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡水平,共聚焦荧光显微镜检测细胞NF-κB活性。结果散寒活血祛白方及其拆方能显著提高H2O2诱导的PIG1及A375细胞的活性;散寒活血祛白方显著抑制H2O2诱导的黑素细胞ASO2,CCL2,CCL3,CCL5,TLR3,TLR9表达的升高,pP65,p-IκB,TLR3和TLR9蛋白表达的升高,以及保护Keratin14表达的降低;散寒活血祛白方明显下调H2O2诱导的IL6,CCL2,CCL3,CCL5表达及ROS浓度;并促进黑色素生成,抑制H2O2诱导的细胞凋亡,抑制NF-IκB活性。结论散寒活血祛白方及其拆方通过抑制TLRs信号通路抑制NF-κB活性从而参与调控信号因子IL6等的表达,抑制CCL2,CCL3,CCL5的分泌,抑制氧化压力下A375细胞和PIG1细胞的炎症反应,进而促进细胞存活和黑色素生成,抑制H2O2诱导的细胞凋亡。

• 单位
  广西中医药大学第一附属医院; 广西中医药大学