诱导温度调控华根霉(Rhizopus chinensis)前导肽脂肪酶的表达及稳定性研究

作者：王同春; 喻晓蔚; 徐岩

来源：工业微生物, 2010, 40(04): 34-39.

• 华根霉脂肪酶
• 诱导温度
• 毕赤酵母
• 蛋白酶降解
• 聚合

比较了7 L发酵罐中不同诱导温度对华根霉前导肽脂肪酶在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达水平和稳定性的影响。通过实验表明在28℃条件下,最大酶活可以达到1412.5 U/mL,是30℃条件下的2.3倍,25℃条件下的1.3倍;而其产率可以达到12811 U/L·h-1,比产率达到82.6 U/gDCW·h-1。同时,在实验过程中发现诱导温度对目的蛋白的降解和聚合有重要的影响。通过对蛋白酶活性的测定和还原SDS-PAGE证实随着诱导温度的提高,蛋白酶活性急剧上升,从而导致由前导肽(37 kD)降解为成熟肽(30 kD)的降解作用的加剧。此现象在30℃条件下最为明显,在诱导84 h时前导肽已经全部降解为成熟肽。另外,通过非还原SDS-PAGE和分析表明随着诱导温度的提高也导致了二聚体的含量也逐渐增加。

• 单位
  食品科学与技术国家重点实验室; 江南大学