N-豆蔻酰基转移酶在大肠埃希氏菌中的表达、纯化及活性检测

作者：王苗苗; 董虎; 卢渊录; 郭慧琛; 孙世琪; 闻晓波^*

来源：动物医学进展, 2021, 42(06): 1-7.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2021.06.001

• N-豆蔻酰基转移酶
• 豆蔻酰化
• 原核表达
• 蛋白纯化

为表达具有活性的N-豆蔻酰基转移酶(N-myristoyltransferase, NMT),用于口蹄疫病毒样颗粒组装效率的优化,将hNMT1基因克隆至pRSFDuet1表达载体,将其转化至大肠埃希氏菌BL21-CodenPlus(DE3)-RIL中,经IPTG诱导,并对诱导前细菌浓度、诱导剂浓度、诱导温度进行优化。目标蛋白经Ni2+亲和层析纯化后进行免疫印迹验证,荧光法测定其活性。结果显示,成功表达出hNMT1,在OD 600 nm值为1.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、表达温度为16℃时,hNMT1蛋白可溶性表达量最高,镍柱纯化后蛋白与抗His标签单克隆抗体在46 ku处特异性结合,与预测大小一致。确定了hNMT1表达的最适条件并成功制备出具有催化豆蔻酰化活性的hNMT1,为研究豆蔻酰化修饰对小RNA病毒蛋白衣壳装配的影响奠定了基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 海南大学; 动物科技学院; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 黑龙江八一农垦大学