重组SIRPα1的体外表达及其在红细胞CD47-SIRPα信号通路研究中的应用

作者：叶璐夷^*; 杨启修; 夏荣伟; 荀春志; 赵俸涌; 张嘉敏; 李勤; 王晨; 向东; 朱自严

来源：中国输血杂志, 2018, 31(09): 934-937.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2018.09.004

• 信号调节蛋白α1(SIRPα1)
• 重组蛋白
• CD47-SIRPα信号通路
• 体外表达
• 红细胞结合试验

目的获得野生型信号调节蛋白α1(SIRPα1)功能结构域重组蛋白,以用于研究正常或异常红细胞的吞噬和清除中CD47-SIRPα信号通路的作用。方法全基因合成人源野生型SIRPα1 IgV结构域编码区;将合成片段构建入携带组氨酸(His)标签的pET-21a大肠杆菌载体,获得重组表达载体。使用大肠杆菌BL21 (DE3)细胞体外表达重组SIRPα1,并通过亲和层析法纯化;利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组SIRPα1;采用基于ELISA的红细胞结合试验评估2名Rh缺失表型献血者与正常Rh表型个体对照在红细胞结合水平的差异;流式细胞术检测红细胞CD47表达;采用单因素方差分析对数据做统计分析。结果成功构建重组表达载体,纯化获得野生型重组SIRPα1。成功建立了基于ELISA的红细胞结合试验方法并应用于评估重组SIRPα1与红细胞的结合。伴随CD47表达量的明显降低,Rh缺失表型个体的红细胞和正常个体相比,其与重组SIRPα1的结合能力下降。结论 CD47-SIRPα信号通路可能在Rh缺失表型红细胞的清除中发挥了作用。

• 单位
  上海市血液中心