迷迭香酸通过上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫的机制研究

作者：程成; 沙舟; 陈想; 张薇^*; 史丽云^*

来源：中国中药杂志, 2022, 47(23): 6450-6456.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20220726.401

• 迷迭香酸
• PINK1/Parkin
• 线粒体自噬
• 巨噬细胞
• 抗菌免疫

探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)通过上调线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫的具体分子机制。将巨噬细胞RAW264.7用不同浓度的迷迭香酸预处理后感染金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus,提取细胞总RNA和总蛋白，利用q-PCR和Western blot法分别检测磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)转录水平和蛋白表达的变化；使用线粒体分离试剂盒分离巨噬细胞线粒体，结合Western blot法检测E3泛素-蛋白连接酶Parkin在线粒体的募集情况及其磷酸化水平的变化；综合运用免疫共沉淀和激光共聚焦显微技术观察PINK1和Parkin在细胞内的共定位情况并观察迷迭香酸对PINK1/Parkin相互作用的影响；利用线粒体自噬抑制剂Mdivi-1(mitochondrial division inhibitor 1)预处理、小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲除技术以及细菌平板计数，检测炎症细胞因子水平和胞内杀菌能力，确证迷迭香酸可以通过上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬增强巨噬细胞抗菌免疫。结果显示，迷迭香酸可显著上调PINK1转录和蛋白水平的表达，促进Parkin由细胞质向线粒体募集并增强其磷酸化水平，促进PINK1和Parkin的相互作用并增强其在巨噬细胞内的共定位；阻断线粒体自噬或敲除PINK1能显著抑制迷迭香酸对巨噬细胞抗菌免疫的促进作用。该研究表明，迷迭香酸通过上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬促进巨噬细胞抗菌固有免疫应答。

• 单位
  南京中医药大学