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摘要
目的:为维生素D生物活性或类维生素D活性的药物筛选建立体外检测模型。方法:利用分子生物学技术构建了含有荧光素酶报告基因的载体。PCR扩增CYP24A1启动子上下游区域,并插入到含有红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和荧光素酶报告基因(luciferase reporter gene)的p RP-RFP-luciferase载体中。经PCR、双酶切和测序鉴定后,转染至Hela细胞,以RFP的表达反映转染效率,荧光素酶的活性水平反映维生素D药物活性的强弱。结果:经鉴定,构建的荧光素酶报告基因载体转染Hela细胞后有红色荧光表达,荧光素酶报告基因检测可有效反映1,25(OH)2D3生物活性。结论:在体外细胞水平上,利用荧光素酶报告基因检测维生素D生物活性的方法简单可行,为后续筛选和研发具有维生素D活性的药物奠定基础。
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