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摘要
目的利用原核表达系统表达、纯化结核分枝杆菌分泌蛋白PknG,并探讨PknG在炎症免疫应答中的作用。方法从NCBI数据库中获取结核分枝杆菌PknG全基因组序列,高保真PCR扩增结核分枝杆菌PknG全基因序列,构建PknG-pET28a融合表达质粒,IPTG诱导表达PknG蛋白,镍柱及不同浓度咪唑纯化及透析PknG蛋白,SDS-PAGE及western blot验证PknG蛋白的表达,脂多糖(LPS)处理巨噬细胞0、12和24 h,通过Real-time PCR及ELISA方法检测促炎细胞因子TNF-α及IL-6的表达。结果成功诱导表达及纯化结核分枝杆菌PknG蛋白,PknG抑制LPS处理的巨噬细胞促炎细胞因子TNF-α及IL-6的表达。结论结核分枝杆菌PknG蛋白抑制LPS诱导巨噬细胞促炎细胞因子TNF-α及IL-6的表达,可作为结核分枝杆菌感染合并脓毒血症过程中治疗的一个潜在靶点。
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