构建重组人SERCA2a基因9型腺相关病毒载体和病毒包装

作者：徐晓霞; 黄焰; 范平; 王红丽; 王凌鹏; 张广伟; 侯月梅

来源：新疆医科大学学报, 2012, (12): 1605-1609.

• 肌浆网钙ATP酶
• 重组腺相关病毒
• 包装 sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase
• adeno-associated virus
• packaging

目的探讨构建重组人SERCA2a基因9型腺相关病毒载体和病毒包装的方法,并包装出rAAV9-hSERCA2a-EGFP。方法根据细菌内同源重组的方法使用腺相关病毒包装系统,将hSERCA2a基因克隆到腺相关病毒载体中,与腺相关病毒包装质粒pAAV pHelper发生重组,通过脂质体共转染人胚肾293(HEK293)细胞,产生重组腺相关病毒,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后进行扩增、纯化和滴度测定(采用荧光滴度检测法)。结果酶切鉴定和DNA测序证明重组腺相关病毒载体rAAV9-hSERCA2a-EGFP构建成功,PCR鉴定可见到阳性扩增条带,rAAV9-hSERCA2a-EGFP滴度高达1×1...

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院