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摘要
【目的】通过对小菜蛾Plutella xylostella化学感受蛋白基因PxylCSP5进行基因克隆、生物信息学分析、时空表达谱分析和体外原核表达，推测PxylCSP5基因在小菜蛾体内的功能，为探究小菜蛾化学感受蛋白基因的功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR法克隆了小菜蛾化学感受蛋白基因PxylCSP5，对该序列进行生物信息学分析。利用RT-qPCR对PxylCSP5基因在小菜蛾不同发育时期和成虫不同组织中的表达量进行分析。构建了小菜蛾PxylCSP5原核表达载体，并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达该蛋白。【结果】小菜蛾化学感受蛋白基因PxylCSP5完整的开放阅读框为393 bp，编码了130个氨基酸残基，预测氨基酸序列的末端含有18个氨基酸长度的信号肽序列，同时含有4个保守的半胱氨酸位点。氨基酸同源比对结果显示，PxylCSP5与谷实夜蛾Helicoverpa zea Hzea CSP的氨基酸序列一致性最高，达到67.91%。RT-qPCR结果表明PxylCSP5在不同发育时期中成虫期表达量最高，与其它发育时期相比较，具有显著差异性（P<0.05）；成虫期不同组织中足的表达量最高，与其它组织比较具有显著差异性（P<0.05）。成功构建了PxylCSP5的原核表达载体pET28a-PxylCSP5并在体外诱导表达。【结论】小菜蛾PxylCSP5基因在成虫足中高表达，初步推测可能该基因功能与寄主定位有关。
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