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摘要
目的探讨微小RNA-17-5p(miR-17-5p)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR-17-5p的表达。将miR-17-5p抑制剂和阴性对照转染食管鳞癌细胞EC9706和TE1, RT-qPCR检测转染后细胞中miR-17-5p的表达水平, 细胞计数试剂盒8和EdU检测转染后细胞的增殖情况, Transwell小室检测细胞的侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验分析miR-17-5p与成视网膜细胞瘤样蛋白2(RBL2)直接的相互作用, Western blot检测转染后RBL2蛋白的表达, RT-qPCR检测RBL2在ESCC组织中的表达, 并分析其与miR-17-5p表达的相关性。结果 ESCC组织中miR-17-5p的相对表达水平为4.222±0.39, 高于正常食管上皮组织(1.081±0.046, P<0.001)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450、KYSE70和KYSE520中miR-17-5p的相对表达水平分别为13.84±1.266、6.453±0.293、11.41±0.520、2.613±0.548、5.251±0.239和4.251±0.195, 均高于正常食管上皮细胞Het-1A(1.007±0.079, 均P<0.05)。Ⅲ+Ⅳ期ESCC组织中miR-17-5p的表达水平(5.094±0.562)高于Ⅰ+Ⅱ期患者(2.934±0.364), 差异有统计学意义(P<0.01);有淋巴结转移患者中miR-17-5p的表达水平(5.523±0.634)高于无淋巴结转移患者(3.533±0.461), 差异有统计学意义(P<0.05)。miR-17-5p高表达患者的生存率低于miR-17-5p低表达患者, 差异有统计学意义(P<0.05)。miR-17-5p抑制剂能下调EC9706和TE1细胞中miR-17-5p的表达, 其表达下调抑制细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验显示, 无论是EC9706细胞还是TE1细胞, 在RBL2 3′UTR-WT载体和miR-17-5p mimic共转染后, 荧光素酶的活性显著降低(P<0.01), RBL2是miR-17-5p的直接作用靶点。Western blot检测显示, miR-17-5p抑制剂组EC9706和TE1细胞中RBL2蛋白的表达量分别为0.936±0.055和0.923±0.048, 明显高于对照组(分别为0.087±0.019和0.102±0.010), 差异均有统计学意义(均P<0.001)。ESCC组织中RBL2的表达水平为0.219±0.510, 低于正常食管上皮组织(0.983±0.324, P<0.001)。ESCC组织中miR-17-5p的表达水平与RBL2的表达水平呈负相关(r=-0.462,P<0.001)。RBL2表达下调能逆转miR-17-5p抑制剂引发的细胞增殖和侵袭能力降低。结论 miR-17-5p参与ESCC的发生、发展过程, 有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。
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