结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的克隆、表达、纯化和复性

作者：刘忠华; 兰国伟; 吕冰; 陈创夫; 万康林

来源：中国预防医学杂志, 2007, (02): 113-115.

• 结核分枝杆菌
• MPT64蛋白
• 克隆
• 表达
• 复性 Mycobacterium tuberculosis
• MPT64
• Clone
• Express
• Renaturation

目的构建结核分枝杆菌分泌蛋白MPT 64的重组质粒,并在大肠杆菌中表达及纯化和复性重组蛋白。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出mpt 64基因片段,插入PKRX-T载体中,再亚克降到表达载体PET30a中,在大肠杆菌中表达;应用组氨酸标签(His-Tag)纯化重组蛋白;在PBS中通过半透膜恢复重组蛋白的天然结构。结果构建了含MPT 64重组质粒的大肠杆菌工程菌,并以包涵体形式表达重组蛋白MPT 64,其占细胞总蛋白的20%~30%;重组蛋白变性后经镍柱纯化,其纯度达90%以上;通过半透膜完全恢复重组蛋白的天然结构。结论具有天然结构和高纯度的重组融合蛋白有可能成为有效的结核病...

• 单位
  石河子大学; 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 传染病预防控制国家重点实验室