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摘要
【目的】制备蓝舌病病毒(Bluetongue virus, BTV)NS4蛋白多克隆抗体，为BTV NS4基因在病毒增殖及颉颃宿主细胞天然免疫应答中的作用研究奠定基础。【方法】构建pCzn1-NS4原核表达载体，经PCR和测序鉴定后将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，用IPTG诱导表达，使用His标签镍柱纯化NS4蛋白，并经SDS-PAGE、Western blotting鉴定。利用NS4蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，经SDS-PAGE和间接ELISA法测定多克隆抗体纯度及效价，以制备的NS4蛋白多克隆抗体为一抗，通过间接免疫荧光试验(IFA)检测BTV感染的BHK-21细胞内NS4蛋白的表达。【结果】成功构建了原核表达质粒pCzn1-NS4,在37℃、IPTG浓度为0.6 mmol/L时诱导8 h获得大量NS4重组蛋白，SDS-PAGE及Western blotting试验结果显示，重组蛋白分子质量约为18 ku,可与兔His-tag抗体发生特异性反应；制备的NS4蛋白多克隆抗体效价在1∶512 000以上。经SDS-PAGE和IFA鉴定，制备的BTV NS4多克隆抗体具有良好的纯度，且在BTV感染的BHK-21细胞中能特异性识别病毒表达的NS4蛋白。【结论】本研究利用原核表达的NS4蛋白制备了特异性多克隆抗体，并初步将该多克隆抗体用于NS4蛋白免疫荧光试验研究，为BTV NS4基因的功能和应用研究提供参考依据。
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