调控脂肪间充质干细胞成软骨分化基因Sox-9和低氧诱导因子1α的表达

作者：张传辉; 李建军; 杨军

来源：中国组织工程研究, 2016, 20(45): 6766-6773.

DOI：10.3969/j.issn.2095-4344.2016.45.012

• 干细胞
• 间充质干细胞
• 胰岛素样生长因子I
• 组织工程
• 脂肪干细胞
• 胰岛素样生长因子1
• 脂肪间充质干细胞
• 低氧诱导因子1
• SOX-9
• 辽宁省自然科学基金

背景:有学者采用基因转染的方法诱导脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化,使种子细胞能够稳定合成和分泌特定的细胞因子,从而达到长期稳定刺激种子细胞增殖、分化和软骨形成的目的。目的:观察胰岛素样生长因子1基因转染对兔脂肪间充质干细胞低氧诱导因子1α和Sox-9表达的影响。方法:(1)取成年新西兰大耳白兔颈后部皮下脂肪组织,分离、培养兔脂肪间充质干细胞,免疫荧光法鉴定后在脂质体介导下应用pc DNA3.1-IGF-1基因转染脂肪间充质干细胞,G418筛选,获得稳定转染的细胞株;(2)实验分为3组:正常传代培养的脂肪间充质干细胞;转染pc DNA3.1的脂肪间充质干细胞;转染pc DNA3.1-IGF-1的脂肪间充质干细胞。(3)RT-PCR及Western blot法检测转染后细胞中胰岛素样生长因子1的表达,MTT法绘制细胞增殖曲线,Dil荧光染料标记后计数细胞增殖效率,免疫荧光法分析转染后细胞低氧诱导因子1α和Sox-9的表达情况,DMMB定量测定总糖胺聚糖含量。结果与结论:(1)成功构建稳定表达pcD NA3.1-IGF-1的细胞株,RT-PCR及Western blot检测证实转染后的细胞株在m RNA水平上获得胰岛素样生长因子1的表达,并且成功翻译为蛋白;(2)MTT提示转染后细胞增殖活性增强;(3)胰岛素样生长因子1基因转染显著提高Dil标记脂肪间充质干细胞的增殖效率;(4)转染后细胞的低氧诱导因子1α和Sox-9表达阳性;(5)胰岛素样生长因子1基因转染组糖胺聚糖含量明显高于其他2组(P<0.01)。(6)结果说明,胰岛素样生长因子1基因转染能够能够有效促进脂肪间充质干细胞增殖,促使阳性表达低氧诱导因子1α和成软骨分化调控基因Sox-9,并有效促进细胞分泌软骨细胞外基质糖胺聚糖。

• 单位
  朝阳市中心医院; 中国医科大学附属盛京医院