科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的观察狼疮鼠肝脏组织细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(MT-CO1)、BCL2相互作用蛋白3(BNIP3)和IL-1β表达特点及其意义。方法以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测狼疮鼠和对照鼠MT-CO1和BNIP3、IL-1β、线粒体微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、p16和p21的mRNA和蛋白水平, 苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学法检测狼疮鼠肝组织, 免疫组织化学明确IL-1β在狼疮鼠肝组织的炎症损害表达部位, 比色法检测2组肝组织丙二醛表达差异;以脂多糖刺激肝细胞和巨噬细胞, 同时以脂多糖刺激巨噬细胞后上清液培养肝细胞, 实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测上述基因蛋白表达, 比色法检测各组肝细胞丙二醛表达差异。免疫荧光检测线粒体活性氧(mtROS)表达。各组均数比较使用单因素方差分析法, 多个样本均数之间的两两比较, 方差齐时用LSD法, 方差不齐时用Tamhane′sT2法。结果 PCR结果显示, 狼疮鼠肝组织MT-CO1和BNIP3的mRNA(0.14±0.04;0.16±0.05)较对照组(0.11±0.04;0.16±0.06)表达明显下降, 差异具有统计学意义(t=7.16, P<0.001;t=4.54, P<0.001), 狼疮组IL-1β、p16和p21(2.06±0.69;0.37±0.14;0.16±0.06)较对照组(0.23±0.07;0.25±0.08;0.11±0.04)表达显著增高, 差异具有统计学意义(t=9.58, P<0.001;t=24.35, P<0.001;t=22.36, P<0.001)。蛋白质印迹法结果与PCR结果趋势一致。HE染色显示狼疮鼠肝组织中有淋巴细胞浸润, 免疫组织化学显示狼疮鼠肝组织中IL-1β阳性细胞主要集中在血窦中, 肝实质细胞表达不明显。狼疮组肝组织丙二醛的含量(0.19±0.10)高于对照组(0.17±0.09), 差异具有统计学意义(t=4.33, P=0.005)。与对照组(0.176±0.072;0.08±0.03)相比, 脂多糖直接刺激AML12肝细胞MT-CO1、BNIP3 mRNA表达(0.069±0.028;0.17±0.07)无明显变化, 差异无统计学意义(t=1.01, P=0.337;t=0.88, P=0.399);脂多糖刺激巨噬细胞IL-1β(0.28±0.09)较对照组(0.15±0.05)表达增高, 差异具有统计学意义(t=28.26, P<0.001)。以脂多糖刺激巨噬细胞12 h后的上清培养肝细胞24 h, MT-CO1和BNIP3在脂多糖刺激组的mRNA水平(0.046±0.026;0.17±0.05)较对照组(0.144±0.083;0.18±0.06)表达明显下降, 差异具有统计学意义(t=7.52, P<0.001;t=4.24, P<0.001), 脂多糖刺激组p16和p21(0.29±0.09;0.27±0.09)较对照组(0.18±0.06;0.22±0.07)表达增高, 差异具有统计学意义(t=13.54, P<0.001;t=8.69, P<0.001)。蛋白质印迹法结果与PCR结果趋势一致。免疫荧光提示脂多糖刺激组(0.25±0.10)mtROS荧光强度高于对照组(0.08±0.03), 差异具有统计学意义(t=4.86, P<0.001)。结论狼疮鼠肝脏免疫炎症可以刺激肝脏实质细胞发生细胞内线粒体功能损害, 狼疮鼠肝脏器官损害机制不止局限于免疫活性细胞的免疫炎症, 还有实质细胞线粒体功能障碍共同参与。
-
单位广州医科大学附属第一医院; 呼吸疾病国家重点实验室; 广州医科大学
