1a,25(OH)2D3对心肌细胞生物钟基因表达的影响

作者：陈玉梅; 范燚; 李杏; 李华; 吴丽洁; 张奇军; 程子杰; 钱玲梅

来源：中华实用儿科临床杂志, 2016, 31(13): 1013-1016.

DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-428X.2016.13.014

• 1a,25(OH)2D3
• 心肌细胞
• 生物钟
• 生物钟基因

目的探讨1a,25(OH)2D3对心肌细胞生物钟基因Bmall mRNA、Per2 mRNA和Rev-erba mRNA表达的影响。方法分离培养7日龄SD大鼠乳鼠心肌细胞,并用免疫荧光法鉴定。原代心肌细胞培养72 h后,设置1a,25(OH)2D3 5个终浓度梯度即0 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、50 nmol/L和100 nmol/L处理心肌细胞2 h,然后提取细胞RNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测生物钟基因(Bmall、Per2、Rev-erba)表达量变化,以确定1a,25(OH)2D3最佳处理浓度。再将培养72 h的原代心肌细胞分为3组,对照组:无血清培养基培养;血清休克组:含体积分数50%马血清的DMEM培养2 h;1a,25(OH)2D3处理组:最佳1a,25(OH)2D3浓度培养2 h。分别于7个时间点(0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h)收集细胞,提取细胞总RNA,再采用RT-PCR分析心肌细胞生物钟基因(Bmal1,Per2,Rev-erba)的转录水平。结果1a,25(OH)2D3培养浓度为50 nmol/L时,Bmall mRNA表达水平最高,Per2和Rev-erba mRNA表达水平最低。与对照组相比,1a,25(OH)2D3处理组和血清休克组均引起心肌细胞Bmal1、Per2和Rev-erba基因呈日周期的节律振荡,且Bmall和Per2的表达模式呈相反的时相表达,在12 h时Bmal1的表达量出现在波峰,而Per2的表达量出现在波谷。Rev-erba的表达变化趋势在8 h开始上升,在1216 h出现最高表达量。结论1a,25(OH)2D3可影响心肌细胞生物钟基因Bmal1、Per2和Rev-erba mRNA表达。

• 单位
  南京医科大学第一附属医院