丙型肝炎病毒非结构蛋白5A及其结构域Ⅱ对小鼠肝细胞糖异生的影响

作者：张娟娟; 刘强; 乔玲^*

来源：中华肝脏病杂志, 2017, 25(12): 902-907.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2017.12.004

• 肝炎病毒, 丙型
• 非结构蛋白5A
• 糖异生
• 腺苷酸活化蛋白激酶
• 固醇调节元件结合蛋白1
• 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)及其片段NS5A结构域I、结构域Ⅱ、结构域III调节小鼠糖异生的机制。方法 60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为6组, 分别将小鼠肝细胞特异性表达重组全长NS5A蛋白及其片段NS5A结构域I、结构域Ⅱ、结构域Ⅲ的慢病毒颗粒经C57BL/6J雄性小鼠尾静脉注射制备动物模型, 以未注射组和注射增强绿色荧光蛋白慢病毒颗粒组为阴性对照。检测全长NS5A蛋白及其片段对小鼠空腹血糖及空腹胰岛素水平的影响;取小鼠肝组织制备石蜡切片, 免疫组织化学方法检查小鼠肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的表达水平;实时荧光定量PCR(qRCR)和(或)Western blot方法检测小鼠肝组织NS5A、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)和PEPCK的表达水平。结果与未注射组(0.65±0.28)和(或)注射EGFP慢病毒颗粒组(0.87±0.36)相比, 注射重组全长NS5A(1.79±0.64)和NS5A结构域(2.24±0.69)Ⅱ慢病毒颗粒的小鼠空腹血糖和胰岛素抵抗指数明显升高(P < 0.01);免疫组织化学和qRCR检测显示糖异生的关键酶PEPCK的表达量明显增多;Western blot检测结果显示NS5A蛋白和NS5A结构域Ⅱ抑制了磷酸化AMPK(Thr172)的水平、提升了SREBP-1和PEPCK的水平。结论 NS5A蛋白和NS5A结构域II可能通过调节AMPK/SREBP-1/PEPCK而影响小鼠肝细胞糖代谢, NS5A结构域II可能在HCV感染引起肝细胞胰岛素抵抗中起重要作用。

• 单位
  天津医科大学代谢病医院