禽CD133胞外结构域原核表达及多克隆抗体的制备

作者：章乔艳; 邵冯金; 俞向前; 谭勋^*

来源：浙江大学学报(农业与生命科学版), 2018, 44(06): 743-747.

• CD133蛋白
• 多克隆抗体
• 家禽

为构建禽CD133胞外区原核表达载体,制备抗CD133多克隆抗体,在生物信息学分析的基础上,选取禽CD133蛋白N端胞外区一段由89个氨基酸残基构成的肽段作为候选抗原,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增其编码基因,亚克隆至pET-28a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导表达;目的蛋白经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。结果表明,构建的原核表达载体可高效表达CD133重组蛋白。蛋白质印迹法(Westernblotting)证实鼠抗禽CD133血清可特异性识别CD133重组蛋白。免疫组化染色结果显示,该抗血清可用于检测组织中的CD133阳性细胞。上述结果表明,利用禽CD133蛋白N端胞外结构域重组蛋白为抗原成功制备出了抗禽CD133多克隆抗体。

• 单位
  动物科学学院; 浙江大学