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摘要
旨在合成一种直接溶解在生理缓冲溶剂中、可注射的功能化修饰的壳聚糖衍生物作为兽用佐剂，用于替代铝盐佐剂。壳聚糖中的氨基与环氧丙基三甲基氯化铵(GTA)中的环氧基团发生加成开环反应，偶联成CS-GTA中间体；再与4-(2-氯乙基)吗啉(ML)发生氮烷基化反应生成终产物CS-GTA-ML。产物通过FI-IR、1H NMR、Zeta电位等表征手段检测其结构及重要成分的嫁接率；通过溶血试验、细胞活性计数(CCK-8)和组织病理分析(HE)方法评估了CS-GTA-ML的生物安全性，为注射剂型的使用提供了安全保障；配伍H7N9亚型流感灭活病毒，对雌性ICR小鼠和SPF鸡进行皮下免疫，测定对其血凝抑制(HI)效价，并通过流式分析仪初步探索脾淋巴细胞活化能力。结果显示，作为抗原递送系统，CS-GTA-ML在不同pH值的水溶液中均可溶解，其中GTA和ML的嫁接率分别约为53%,15%,且带有15.8 mV的正电荷。当质量浓度在1 g/L以下时，体外脾细胞存活率在88%以上，且对机体重要组成器官无损伤；当质量浓度高达10 g/L时，体外红细胞溶血率仅0.5%左右，具有良好的生物相容性。与单一的H7N9疫苗和ISA206+H7N9疫苗对比，CS-GTA-ML有显著的血凝抑制作用。通过相关细胞因子及流式细胞分析发现CS-GTA-ML倾向于CD4+T细胞分化趋势，具有体液免疫和细胞免疫双重免疫效力。
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