AEG-1肺归巢域与Flagellin融合基因的杆状病毒制备及鉴定

作者：王希; 王琳; 张喆; 龙敏; 董轲; 张惠中^*

来源：中国实验诊断学, 2018, 22(10): 1807-1812.

• 病毒样颗粒
• AEG-1
• 肺归巢域
• Flagellin

目的通过重叠PCR方法获得AEG-1C-Flic融合基因,采用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统获得重组AEG-1C-Flic杆状病毒,为后续AEG-1C-Flic病毒样颗粒疫苗的制备奠定基础。方法从鼠伤寒沙门菌的基因组中PCR扩增细菌鞭毛蛋白Flagellin,采用重叠PCR的方法将AEG1肺归巢域段基因与Flagellin融合,并添加猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白gp41信号肽与跨膜区,构建AEG-1C-Flic pFastBacTM重组表达载体,转座大肠杆菌E.coliDH10Bac感受态细胞后获得重组杆粒,重组杆粒转染昆虫细胞Tn5,获得AEG-1CFlic重组杆状病毒,并采用Western Blot方法对该病毒进行鉴定。结果构建的AEG-1C-Flic杆状病毒表达载体经双酶切及测序正确,通过转化E.coli DH10Bac感受态细胞获得重组Bacmid,经PCR鉴定大小正确,Western Blot结果显示Bacmid转染Tn5细胞后成功获得重组杆状病毒rBv AEG-1C-Flic。结论成功构建的AEG-1C-Flic杆状病毒可用于新型AEG1-病毒样颗粒疫苗的制备。

• 单位
  第四军医大学; 唐都医院