风寒湿血清影响软骨细胞TRPM8/TRPV1/TRPA1表达的研究

作者：王林; 徐勤光; 蒋鼎; 谭则成; 王学宗; 申安平; 詹红生; 曹月龙^*

来源：时珍国医国药, 2023, 34(08): 2022-2026.

• 风寒湿痹
• 温感通路
• Western Blot
• RT-qPCR

目的 基于中医风寒湿致痹理论，探索软骨细胞温感蛋白TRPM8/TRPV1/TRPA1在风寒湿血清干预后的的表达情况。方法 采用改良Hulth法结合人工气候箱制备风寒湿血清用以后续干预，取新生SD大鼠软骨细胞结合白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)构建软骨细胞炎症；细胞分组：Control组、KOA组(IL-1β 20ng/ml)、NC组(IL-1β 20ng/ml+正常大鼠血清10%)、FHS组(IL-1β 20ng/ml+风寒湿大鼠血清10%);CCK8法检测风寒湿血清干预后软骨细胞的增殖活性，甲苯胺蓝及阿利新蓝染色鉴定软骨细胞形态，RT-qPCR与Western blot检测软骨细胞炎性因子及TRPA1、TRPM8、TRPV1基因蛋白的表达。结果 风寒湿血清浓度≥20%能显著抑制软骨细胞的增长，10%的血清浓度干预24h、48h对软骨细胞活力无明显影响；Western blot显示，风寒湿血清干预组TRPM8、TRPV1、TRPA1、TNFα、IL-1β、TNFα蛋白表达量明显升高(P<0.05);RT-qPCR显示，风寒湿血清干预组IL-1β、TNFα、TRPA1、TRPV1、TRPM8 mRNA的相对表达均显著升高(P<0.05)。结论 风寒湿血清干预能促使温感蛋白及炎性因子的表达升高，加重膝骨关节炎。风寒湿致痹机制可能通过调控温感通路TRPA1、TRPM8、TRPV1基因蛋白的表达有关。该研究可为天气因素影响骨关节炎及治疗靶向选择提供一定科学基础。

• 单位
  上海中医药大学附属曙光医院