抗体类药物蛋白A残留检测方法的方法学验证

作者：付志浩; 钟欣; 徐刚领; 于传飞; 王兰^*

来源：中国新药杂志, 2022, 31(12): 1169-1177.

• 蛋白A残留
• 单克隆抗体
• 方法学验证
• 质量控制
• 酶联免疫吸附测定

目的:对抗体类药物的蛋白A残留ELISA法检测进行方法学验证，为业界相应质控方法的建立和验证提供参考。方法:将640～10 pg·mL-1系列稀释的蛋白A标准品分别加标至3个不同稀释浓度的抗体类样品中，加入至预包被抗蛋白A单抗的ELISA板条中，洗涤后加入生物素标记的检测抗体，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(SA-HRP),再次洗涤后加入3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)底物，然后加入终止液后进行酶标仪读板，利用标准曲线回算加标样品的蛋白A含量。2个实验员分别进行3 d实验，每天进行3次独立实验，对该方法进行了全面的方法学验证。结果:各样品各浓度加标点的准确性均满足70%～130%,重复性和中间精密度均≤20%,方法的范围为10～640 pg·mL-1,方法的定量限为10 pg·mL-1,该方法专属性良好。另外该方法具有良好的蛋白A配基通用性。结论:对方法的准确性、精密度、线性、范围、定量限和专属性进行了全面的验证，为相应方法学验证的科学性和合理性设计提供了参考。

• 单位
  中国食品药品检定研究院