葡萄DFR蛋白的生物信息学分析及自激活检测

作者：刘海霞; 温灏宇; 杨波; 李晓慧; 张鹏飞; 温鹏飞^*

来源：山西农业大学学报(自然科学版), 2018, 38(12): 38-43.

DOI：10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201808031

• 生物信息学
• 诱饵载体
• 酵母双杂交

[目的]生物信息学分析葡萄DFR蛋白的功能结构域和蛋白互作预测,构建DFR酵母双杂交诱饵载体,并检测其自激活活性。[方法]利用NCBI中的CDD分析DFR蛋白保守区域,STRING在线软件对DFR蛋白互作情况进行预测,采用PCR技术扩增出葡萄DFR基因,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,PEG/LiAc法将阳性质粒pGBKT7-DFR转化至酵母AH109中,通过缺陷型培养基培养进行自激活检测。[结果]DFR蛋白保守区域有NADP结合位点,预测到DFR蛋白与MybPA1蛋白有互作关系。成功构建了诱饵载体pGBKT7-DFR,并且对酵母菌无毒性,对报告基因无自激活功能。[结论]本研究通过生物信息学分析得出,酵母诱饵蛋白表达载体pGBKT7-DFR,可以作为酵母双杂交诱饵载体筛选与DFR相互作用的蛋白,进而对其进行功能性研究。

• 单位
  山西农业大学; 西北农林科技大学; 动物科技学院