血小板衍生生长因子-BB对骨髓间充质干细胞多向分化及自噬相关蛋白表达的影响

作者：李琳; 蔡宇艺; 何江峰; 扈梓悦; 葛剑平^*

来源：同济大学学报(医学版), 2022, 43(02): 165-173.

• 牙髓再生
• 血小板衍生生长因子-BB
• 多向分化
• 细胞自噬
• 细胞归巢

目的 观察血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB, PDGF-BB)对骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)多向诱导分化以及自噬相关蛋白表达的影响；建立异位牙髓再生模型，探讨PDGF-BB对再生牙髓样组织中自噬相关蛋白表达的影响。方法 体外分离鉴定大鼠BMSCs,随机分为4组，每组培养基中分别加入0、10、50、100 ng/mL PDGF-BB,通过CCK-8、Transwell、qRT-PCR及细胞免疫荧光染色技术，检测不同浓度PDGF-BB对BMSCs增殖、迁移、多向诱导分化及自噬相关蛋白表达的影响，确定PDGF-BB趋化BMSCs细胞归巢的最佳工作浓度范围。依据是否放入PDGF-BB,将试验大鼠随机分为两组：对照组(Collagen TypeⅠ),PDGF-BB诱导组(50 ng/mL PDGF-BB+Collagen TypeⅠ),将PDGF-BB联合Collagen TypeⅠ支架移植入经过根管预备后的离体牙根管内，并移植于大鼠腹部皮下。分别于术后2、4个月，采用免疫组化染色技术观察异位再生牙髓样组织的再生效果及其自噬相关蛋白ATG5和LC3的表达。结果 CCK-8结果显示，BMSCs增殖活性随PDGF-BB浓度升高递增(P<0.05);Transwell结果显示，细胞迁移数随PDGF-BB浓度升高递增(P<0.05);qRT-PCR结果显示，OPN、Runx2、MAP2、β-Ⅲ-tubulin mRNA表达量随PDGF-BB浓度升高递增(P<0.05),当PDGF-BB浓度达到100 ng/mL时，mRNA表达量达到最大值；细胞免疫荧光染色结果显示，ATG5和LC3阳性细胞数量随PDGF-BB浓度升高递增，50 ng/mL PDGF-BB诱导后，ATG5和LC3阳性细胞数最大；术后4个月PDGF-BB诱导组得到的再生牙髓样组织形态与天然人牙髓组织相近，其ATG5、LC3蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论 PDGF-BB能够促进大鼠BMSCs增殖，对BMSCs具有显著趋化作用。PDGF-BB能够促进大鼠BMSCs向成骨细胞及神经细胞分化，并促进自噬相关蛋白的表达。联合使用PDGF-BB可以有效获得内源性BMSCs迁移，促进大鼠体内牙髓样组织异位再生，及自噬相关蛋白表达。

• 单位
  同济大学附属口腔医院; 同济大学