电离辐射对沉默ATRX的HeLa细胞DNA损伤修复的影响

作者：唐庚; 史耀挺; 孔维轩; 柯希扬; 李成想; 邱禹淇; 于雷; 杨艳明; 王志成

来源：吉林大学学报(医学版), 2019, 45(05): 981-985+1193.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20190501

• 电离辐射
• α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白
• γH2AX蛋白
• Rad51蛋白
• DNA损伤

目的:靶向沉默宫颈癌HeLa细胞中α-地中海贫血/精神发育迟滞综合征X染色相关蛋白（ATRX）,检测电离辐射对ATRX、γH2AX和Rad51蛋白表达及γH2AX和Rad51焦点数的影响,探讨ATRX参与辐射后HeLa细胞DNA损伤修复的作用。方法:3条ATRX-shRNA和阴性对照（Control-shRNA）的慢病毒载体转染293T细胞,收集慢病毒并感染HeLa细胞,利用puromycin筛选获得稳定沉默ATRX的细胞系,分别命名为shA1-HeLa、shA2-HeLa、shA3-HeLa和shCon-HeLa,采用Western blotting法检测沉默ATRX效率以及电离辐射后ATRX、γH2AX和Rad51蛋白的表达,采用免疫荧光技术观察shCon-HeLa和shA1-HeLa组中γH2AX和Rad51焦点并计数其数量。结果:shCon-HeLa细胞中可见ATRX蛋白表达,而shA1-HeLa、shA2-HeLa和shA3-HeLa细胞中均无ATRX蛋白表达,表明沉默效率较高。在2和8Gy剂量照射后1、6和24h,shConHeLa组ATRX蛋白表达量逐渐升高,24h时表达量最高,且8Gy照射后1、6和24h表达量均较高。4Gy照射后0～6h,与shCon-HeLa组比较,shA1-HeLa组γH2AX焦点数在1h明显升高（P1-HeLa组Rad51焦点数在1h明显升高（P1-HeLa焦点数仍明显高于shCon-HeLa组（P1-HeLa组细胞中γH2AX和Rad51蛋白表达量均较shCon-HeLa组增加。结论:成功获得稳定沉默ATRX的HeLa细胞模型,电离辐射可诱导ATRX蛋白表达量增加,且沉默ATRX的HeLa细胞中γH2AX和Rad51焦点数及蛋白表达量均高于对照组,提示ATRX参与了辐射诱导的DNA损伤修复过程。

• 单位
  吉林大学; 吉林大学第二医院; 黑龙江省农垦总局总医院; 公共卫生学院