摘要
目的探讨柚皮素(NGN)对创伤性脊髓损伤后运动功能修复的作用及其机制。方法选取36只6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠, 按照随机数字表法分为假手术组、生理盐水组和NGN组, 每组12只。假手术组小鼠仅行椎板切除术, 不损伤脊髓;生理盐水组和NGN组小鼠利用钳夹法进行脊髓损伤手术。3组小鼠均从术前3 d开始每天灌胃给药(假手术组和生理盐水组小鼠给予生理盐水灌胃, NGN组小鼠给予50 mg/kg NGN灌胃给药), 手术当天不给药, 术后第1天恢复灌胃给药, 1次/d, 持续7 d, 之后隔天灌胃给药, 持续28 d。采用BMS评分法评估小鼠运动功能的恢复情况。冰冻切片行HE和尼式染色评估脊髓组织学改变。Western blotting和免疫荧光染色实验检测组织自噬蛋白的表达水平。体外培养小鼠小胶质细胞BV2, 分为NGN组(NGN处理)与对照组(空白溶剂处理), 采用CCK-8法检测细胞活性, 利用腺病毒荧光示踪体系评估自噬流情况。与神经元细胞N2a建立共培养体系后, 采用CCK-8法检测细胞活性, 采用细胞划痕实验检测细胞迁移愈合能力。结果给予同等护理条件及康复活动下, 损伤后第14、21、28天, NGN组小鼠BMS评分明显优于生理盐水组小鼠(P<0.05)。NGN可改善脊髓损伤后神经元数量和形态, 并减少损伤组织中LC3B和p62的蓄积(P<0.05或P<0.001)。体外实验表明NGN呈剂量依赖性(6.25、12.5、25、50 mmol/L)增加BV2细胞活性(P<0.01), 同时促进BV2细胞自噬发生和自噬溶酶体形成。细胞共培养条件下, NGN组BV2细胞可明显提高N2a细胞活性(P<0.05)并促进细胞迁移(P<0.01)。结论 NGN可促进脊髓损伤后运动功能修复, 其可能的机制是NGN通过提高小胶质细胞的自噬作用, 促进神经元修复。
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单位青岛大学附属医院; 青岛市市立医院