Transwell接触共培养促进单散iPSCs生长及分化

作者：刘庆; 郭永龙; 郭晓令; 连瑞玲; 陈建苏

来源：中国病理生理杂志, 2014, 30(08): 1404-1409.

• 诱导多能干细胞
• 角膜内皮细胞
• Transwell接触共培养

目的:观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)生长及分化的作用。方法:将12代牛角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)接种在Transwell小室底面培养8 h后,应用Accutase消化及40μm过滤处理获得单散iPSCs,将其接种到已有CECs的Transwell小室内共培养14 d,前3 d使用mTeSR1培养基,第4天开始用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基。分别进行实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、免疫荧光、死活细胞染色及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,对iPSCs多能特性表达及分化进行鉴定。设定单散iPSCs共培养组为实验组,常规培养iPSCs组为对照组(一),非共培养单散iPSCs组为对照组(二)。结果:培养牛CECs形态呈典型的六边形铺路石样外观。人iPSCs呈克隆样生长,共培养3 d后iPSCs贴壁呈单散细胞生长,免疫荧光检测未分化标志Nanog和Oct4呈阳性。qPCR检测Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达,实验组与对照组(一)比较差异无统计学意义(P>0.05)。死活细胞染色显示,实验组死细胞明显减少,与对照组(二)比较差异有统计学意义(P<0.01)。共培养14 d后,人iPSCs形态比较均一,呈多边形,体积增大,无明显克隆团块;ALP染色阴性;免疫荧光染色ZO-1、AQP1和CD31表达阳性,CD34和CD133表达阴性。qPCR检测Oct4、Nanog和Sox2 mRNA表达明显下调,与对照组(一)比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:与牛CECs共培养可增强人单散iPSCs活性,使iPSCs形态上向内皮样细胞转化,表达部分CECs的标志。Transwell接触共培养模型可以促进单散iPSCs生长及分化。

• 单位
  暨南大学附属第一医院; 暨南大学