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摘要
目的 基于微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)建立一种检测前列腺癌(prostatic cancer, PCa)尿液谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因甲基化的方法，并对其进行优化。方法 本研究收集20例前列腺癌尿液样本，设计并筛选引物和探针，通过调整亚硫酸氢盐转化时间及ddPCR反应体系中引物浓度、探针浓度、退火温度、循环次数、变性时间和退火延伸时间对ddPCR检测方法进行优化。结果 尿液DNA亚硫酸氢盐转化的最佳时间是2h 10min,最佳引物浓度是700nmol/L,最佳扩增温度为58.3℃,最佳循环次数是50次，最佳变性时间是30s,最佳退火延伸时间是60s,本研究范围内探针浓度对ddPCR影响不大，可根据实验自行调整探针浓度。结论 本研究建立并优化了ddPCR检测前列腺癌尿液样本GSTP1基因甲基化方法，提高了ddPCR检测尿液中痕量DNA的性能。
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单位恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室; 北京市肿瘤防治研究所; 中国人民解放军总医院
