小鼠晶体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究

作者：季樱红; 卢奕; 李娜; 金红; 杨芃原

来源：中国实验动物学报, 2008, 16(02): 105-110.

DOI：10.3969/j.issn.1005-4847.2008.02.007

• 小鼠晶体蛋白
• 蛋白质组
• 双向凝胶电泳
• 质谱

目的应用双向电泳和质谱技术研究5周龄小鼠晶体蛋白质组。方法提取小鼠晶体总蛋白,进行固相pH梯度(IPG)等电聚焦双向电泳,胶体考马斯亮蓝R-250染色,使用PDQuest 7.30图像分析软件分析电泳图像。选择主要蛋白点胶上酶解,应用基质辅助激光解析电离飞行时间/飞行时间(MALDI-TOF/TOF)仪器进行串联质谱(MS/MS)鉴定。结果上样量为882μg和190μg时,分别检测370±41蛋白点(n=3)和57±5个蛋白点(n=3)。高上样量能够较好地分离晶体低丰度蛋白,如念珠状纤维结构蛋白BFSP;低上样量可很好地分离高丰度蛋白—晶体蛋白(包括αA、αB;βA1~βA4;βB1~βB3;γA~γF和γS等)。质谱鉴定得到1种细胞骨架蛋白和16种高丰度晶体蛋白。结论双向电泳和质谱技术有效考察了晶体总蛋白质,为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径。

• 单位
  复旦大学; 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院