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摘要
目的 探讨反义survivin 脂质体复合物对胰腺癌细胞增殖和凋亡效应的影响及机制 ,为胰腺癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法 用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染胰腺癌细胞系PANC 1细胞 ;通过RT PCR、Western印迹试验检测survivin表达水平 ;MTT法测量细胞生长情况 ;流式细胞术测定caspase 3活性及凋亡率 ;电镜观察细胞形态学变化 ;应用激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价脂质体反义复合物在亚细胞水平对survivin蛋白分子的影响。结果 反义survivin脂质体复合物有效下调survivin表达水平 ,并呈剂量依赖关系 ,IC50 值为 30 0nmol/L ,最大效应浓度为5 0 0nmol/L ,此时表达水平下调了 80 %。类似细胞生长抑制结果为MTT实验所证实。与此同时 ,caspase 3活性和凋亡率随转染时间延长而逐渐递增 ,并出现凋亡形态学变化 ,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。免疫荧光分析 ,标记有FITC 绿荧光染色的survivin蛋白分子在未转染的细胞浆中清晰可见 ,并呈“斑点”状分布 ;而在转染细胞中几乎没有发现 ,但是符合细胞凋亡的形态学特征。结论 靶向抑制联系细胞增殖和凋亡的关键分子 survivin在胰腺癌治疗中有良好的应用前景
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