微小RNA-134靶向叉头盒蛋白M1对喉鳞癌细胞顺铂耐药性的影响

作者：白云飞; 崔晓波; 王博谦; 王亚平; 杨莉娜; 刘佳荣; 覃洁^*

来源：中国临床药理学杂志, 2022, 38(18): 2151-2156.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2022.18.009

• 微小RNA-134
• 叉头盒蛋白M1
• 喉鳞癌细胞
• 顺铂耐药性

目的 探讨微小RNA-134(miR-134)靶向叉头盒蛋白M1(FOXM1)对喉鳞癌细胞顺铂(DDP)耐药株FD-LSC-1/DDP的DDP耐药性的影响。方法 体外培养NP69、FD-LSC-1、FD-LSC-1/DDP细胞，用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测NP69、FD-LSC-1、FD-LSC-1/DDP细胞中miR-134、FOXM1 mRNA表达水平。将FD-LSC-1/DDP细胞分为空白对照组、miR-134-mimics-NC组(阴性对照组)、miR-134-mimics组(过表达miR-134)、miR-134-mimics+pcDNA组(共转染miR-134-mimics和pcDNA)、miR-134-mimics+pcDNA-FOXM1组(共转染miR-134-mimics和pcDNA-FOXM1)。倒置荧光显微镜下观察转染效果；以空白对照组、miR-134-mimics-NC组、miR-134-mimics组FD-LSC-1/DDP细胞为研究对象，以qRT-PCR法检测细胞中miR-134表达；以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力及对DDP的耐药性；以流式细胞仪检测细胞凋亡率；以蛋白质印迹法检测FOXM1、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞增殖相关核抗原(Ki-67)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。用TargetScan数据库预测miR-134与FOXM1的靶向关系，通过双荧光素酶报告基因实验加以验证并检测miR-134对FOXM1的调控作用。结果 与NP69细胞比较，FD-LSC-1细胞中miR-134表达水平显著降低，FOXM1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与FD-LSC-1细胞比较，FD-LSC-1/DDP细胞miR-134表达水平显著降低、FOXM1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。空白对照组、miR-134-mimics-NC组、miR-134-mimics组的miR-134表达水平分别为1.02±0.15,1.01±0.15,1.57±0.23,药物半数抑制浓度(IC50)分别为(24.25±2.05),(23.67±1.78),(8.64±1.57)μg·mL-1,细胞增殖抑制率分别为(17.65±2.66)%,(17.63±2.65)%,(45.87±6.88)%,凋亡率分别为(15.09±2.26)%,(14.97±2.25)%,(38.77±5.82)%,miR-134-mimics组与空白对照组、miR-134-mimics-NC组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组、miR-134-mimics-NC组比较，miR-134-mimics组FD-LSC-1/DDP细胞Bax、caspase-3蛋白表达均显著升高，PCNA、Ki-67、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。TargetScan数据库预测显示FOXM1是miR-134的潜在靶基因，双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系；上调FOXM1逆转了miR-134过表达对FD-LSC-1/DDP细胞顺铂耐药性的作用。结论 过表达miR-134能提高FD-LSC-1/DDP细胞化疗敏感性，可能是通过靶向下调FOXM1表达实现的。

• 单位
  内蒙古医科大学附属医院