基于Gap-LCR反应可视化检测A类大豆皂苷缺失

作者：谈美霞; 李文帅; 武国瑞; 王敏; 杜维俊; 岳爱琴^*; 赵晋忠^*

来源：山西农业大学学报(自然科学版), 2020, 40(02): 19-26.

DOI：10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201912031

• 大豆
• A类皂苷
• Gap-LCR反应
• 可视化检测

[目的]A类大豆皂苷是大豆及其制品产生苦涩味的主要原因,建立一种快速鉴定A类大豆皂苷缺失的大豆种质资源方法,对今后大豆品质育种具有重要的意义。[方法]通过比对大豆A类皂苷合成关键酶基因GmSg-5/Gmsg-5基因序列,找出单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点分别设计了GmSg-5/Gmsg-5基因的特异探针,开发基于DNAzyme的缺口连接酶链式反应(Gap-LCR)鉴定GmSg-5/Gmsg-5基因特异性的可视化快速检测方法。[结果]根据GmSg-5/Gmsg-5基因1 127SNP位点的G/A变异,分别设计了GmSg-5和Gmsg-5基因的2套特异性互补探针L*、R、Ln、Rn*和L、R、Ln、Rn。通过优化Gap-LCR反应体系,在0.2μmol·L-1模板浓度、缓冲液pH值8.4、探针浓度1.2μmol·L-1条件下建立了可视化检测体系,显色反应10min即可分别实现对GmSg-5/Gmsg-5基因的可视化特异检测。[结论]本研究从基因水平上建立了一种鉴定A类大豆皂苷缺失的可视化检测方法,该方法快速、简单、实用、经济。

• 单位
  山西农业大学