摘要
目的利用单因素实验法建立和优化临床万古霉素HPLC分析方法,为临床监测万古霉素血药浓度、调整万古霉素临床给药剂量和个体化差异给药提供定量分析方法。方法比较国内外已报道的万古霉素HPLC测定方法,利用本院WATERS液相系统进行方法验证,以40%的硫酸锌沉淀处理血液标本,最终选择Waters ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱为分析柱。实验设计通过梯度改变柱温、pH、流动相的组成比例,验证每种条件对实验结果的容量因子(K),拖尾因子(T),分离度(R)的影响,最终得到最佳色谱条件为流动相0.05 mol·L-1KH2PO4缓冲溶液(用磷酸调pH至2.85)-乙腈-甲醇(91.5∶8∶0.5),紫外检测波长为200 nm,流速为1 mL·min-1,柱温30℃,进样量为20μL。结果万古霉素的最低检测质量浓度为0.05 mg·L-1,在0.1~64.0 mg·L-1时线性较好(r=0.999 2),相对回收率为97.5%~100.1%,日内、日间RSD均<2%,R为2.1。结论该方法灵敏,快速,简便,特异性且稳定可靠,适用于临床万古霉素血药浓度的监测及临床药学的研究。
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单位浙江省台州医院