磁珠法结合定量PCR检测肠道病毒71型灭活疫苗中宿主细胞DNA残留量的验证及应用

作者：张静静; 宋路萍; 安文琪; 马小伟; 梁雪爽; 郭冰峰; 荆新蕊; 马超援; 张少宁; 毕利利; 王斌^*

来源：国际生物制品学杂志, 2018, 41(03).

• 定量聚合酶链反应
• Vero细胞
• DNA残留
• 磁珠法
• 宿主细胞

目的对磁珠法结合定量PCR(quantitative PCR,qPCR)检测肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)(EV71疫苗)中宿主DNA残留量进行适用性验证及应用。方法利用微磁珠与蛋白溶液中DNA的特异性结合,来提取样品中残留的宿主细胞DNA。将已知浓度的细胞DNA对照系列稀释后,作为标准品DNA与提取的DNA同时进行qPCR扩增。根据标准品DNA的循环阈值与浓度之间的线性关系,对未知样品中残留DNA进行定量分析。结果标准品检测范围在0.03～3 000.00 pg/反应。该方法的标准曲线决定系数≥0.980,扩增效率为90.0%～110.0%。质控样品回收率为50%～150%,相对标准偏差均小于30%。实验结果的各项参数均在要求范围内。结论磁珠法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点,qPCR能够简便、快速、准确地对EV71疫苗生产过程中的DNA残留量进行定量测定。该法适用于EV71疫苗中DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。

• 单位
  华兰生物工程股份有限公司