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摘要
为揭示酸橙内生菌Bacillus thuringiensis Bt028几丁质酶的基本酶学性质，采用离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法对菌株Bt028发酵液中的几丁质酶进行分离纯化鉴定，并考察该几丁质酶的最适温度、最适pH、催化动力学参数等性质。结果表明，Bt028菌株发酵液经离心、硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶G-100层析分离纯化后获得电泳纯几丁质酶比活力为681.78 U/mg，纯化倍数为3.21，回收率15.52%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明，几丁质酶的分子质量为65 kDa。酶学性质研究结果表明，该酶的最适反应温度为60℃，最适反应pH为6.5，在温度低于60℃、pH5.5～7.5时有较好的稳定性；Mg2+、Ca2+、Hg2+、Co2+对该酶活力有抑制作用，而Cu2+和Fe3+有一定的促进作用；低浓度的甲醇、乙醇、正丙醇和二甲亚砜使酶的活性增加，但当浓度继续增大，反而会抑制酶的活性；丙酮对几丁质酶有激活作用，而甲醛对几丁质酶有抑制作用。在最适催化条件下，几丁质酶催化反应的米氏常数Km、最大反应速率Vmax、酶的转换数Kcat分别为29.533 mg/mL、108.696μmoL/（L·min）和0.527/min。研究结果可为该酶的实际应用提供必要的工艺参数。
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单位生物工程学院; 桂林理工大学
