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摘要
D-聚乳酸是一种生物可降解材料,具有高热稳定性,生物合成其单体D-乳酸将具有广阔的前景。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增葡萄糖脱氢酶基因gdh,与表达载体pETduet-1连接获得pETduetGDH;再以粘质沙雷氏菌基因组DNA为模板,PCR扩增乳酸脱氢酶基因ldh,与已构建的pETduet-GDH连接获得pETduet-LG,转化E.Coli BL21共表达。过表达GDH和LDH大肠杆菌可不对称还原丙酮酸合成D-乳酸。经全细胞转化条件优化发现,添加NAD+能提高起始反应速度,在最佳温度37℃、0.2 mol/L磷酸缓冲液、pH7.0、细胞浓度OD值为40和丙酮酸20 g/L时,底物转化率可达86.5%,D-乳酸产量为17.3 g/L。
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单位华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室
