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摘要
目的探讨Delta样蛋白1(DLK1)在垂体腺瘤细胞株中的表达水平及生物学功能。方法体外培养垂体腺瘤GH3、MMQ和ATT20细胞, 分为实验组和对照组, 实验组细胞分别给予抗DLK1抗体1 μg/ml和5 μg/ml, 对照组细胞给予等体积的二甲基亚砜, 共培养24、48及72 h。采用蛋白质免疫印迹实验检测各个细胞株DLK1的水平和谱系来源, 细胞增殖实验检测细胞的活力, 酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞的分泌能力[GH3细胞:GH和胰岛素样生长因子(IGF-1), MMQ细胞:催乳素(PRL), ATT2细胞:促肾上腺皮质激素(ACTH)], 细胞免疫荧光实验和蛋白质免疫印迹实验检测抗DLK1抗体对GH3细胞表达PIT1蛋白水平的影响。结果蛋白质免疫印迹实验结果证实, GH3和MMQ细胞为POU结构域转录因子1(POU1F1)谱系细胞, DLK1表达水平高;ATT20细胞为T盒转录因子19(TBX19)谱系细胞, DLK1表达水平低。与抗DLK1抗体共培养48 h, 仅GH3细胞5 μg/ml实验组的细胞活力高于对照组(P=0.017);共培养72 h, GH3细胞1 μg/ml、5 μg/ml实验组(均P<0.05)及MMQ细胞5 μg/ml实验组(P=0.041)的细胞活力高于对照组;ATT20细胞的实验组与对照组所有时间点的细胞活力差异均无统计学意义(均P>0.05)。与抗DLK1抗体培养24、48、72 h, GH3细胞对照组培养上清中GH含量分别为(8.8±0.6)、(10.4±0.8)及(13.2±0.9)ng/ml, 5 μg/ml实验组分别为(6.7±0.7)、(6.1±0.4)及(4.7±0.4)ng/ml, 各时间点两组比较差异均有统计学意义(均P<0.001);GH3细胞对照组3个时间点培养上清中IGF-1的含量分别为(12.5±0.7)、(14.6±1.0)及(15.9±1.1)ng/ml, 5 μg/ml实验组分别为(10.9±0.7)、(11.8±0.8)及(8.3±0.7)ng/ml, 48 h和72 h时间点两组的差异均有统计学意义(均P<0.05);与对照组相比, ATT20细胞5 μg/ml实验组各时间点分泌ACTH的量及MMQ细胞分泌PRL的量差异均无统计学意义(均P>0.05)。细胞免疫荧光实验和蛋白质免疫印迹实验均显示, 与抗DLK1抗体共培养24 h, GH3细胞5 μg/ml实验组的DLK1和PIT1蛋白水平均明显低于对照组(均P<0.01)。结论 DLK1在POU1F1谱系垂体腺瘤细胞株高表达, 在TBX19谱系垂体腺瘤细胞株低表达。抗DLK1抗体抑制POU1F1谱系GH3细胞分泌GH和IGF-1, 促进GH3细胞增殖, POU1F1可能是DLK1的下游靶点分子。
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