酵母双杂交筛选胎肾上腺cDNA文库中HNP-1结合蛋白

作者：杜润滋; 邓璐霞; 黄宁; 罗朝志

来源：现代预防医学, 2011, (18): 3723-3726+3729.

• α防御素
• HNP-1
• 成熟肽
• 酵母双杂交
• 胎肾上腺cDNA文库
• 促肾上腺激素受体 α-defensins
• HNP-1
• Mature peptide
• Yeast two-hybrid system
• Fetal adrenal cDNA library
• Melanocortin 2 receptor

[目的]筛选胎肾上腺cDNA文库中与α防御素HNP-1成熟肽具有相互作用的蛋白分子。[方法]通过聚合酶链反应(PCR)成功获得HNP-1成熟肽基因插入酵母表达载体pGBK-T7中构建诱饵质粒,同时提取胎肾上腺RNA,SMART技术制备人胎肾上腺cDNA文库,并采用Matchmaker LexA酵母双杂交系统从胎肾上腺cDNA文库中筛选与HNP-1成熟肽相互作用的蛋白。最后通过PCR筛选获得阳性克隆并测序,而后经回转实验,GST pull down以及免疫共沉淀再次验证两者的相互作用关系。[结果]成功构建诱饵质粒pGBKT7-HNP-1以及胎肾上腺cDNA文库并在酵母细胞中正确表达,筛选获得H...

• 单位
  四川大学华西医院; 四川大学