恶性疟原虫环子孢子蛋白的表达及纯化

作者：王婉如; 刘宇阳; 高雪峰; 杨林鹏; 李宣钟; 陈勇^*

来源：中国病原生物学杂志, 2021, 16(11): 1307-1311.

DOI：10.13350/j.cjpb.211114

• 疟原虫,恶性
• 环子孢子蛋白
• 表达
• 纯化

目的 构建His-CSP/pGAPZαA重组表达质粒，转化并筛选阳性His-CSP/pGAPZαA/GS115重组酵母菌，通过发酵和层析纯化获得高纯度His-CSP蛋白。方法 根据葛兰素史克公司RTS’S/AS01疫苗在GenBank公布的基因序列，选择去除14个NANP重复序列，并在其N末端加6个His标签作为目的基因。人工合成的目的基因克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA,构建His-CSP/pGAPZαA重组表达质粒，转化酵母菌并筛选阳性转化子。发酵阳性His-CSP/pGAPZαA/GS115重组酵母菌并收获表达产物，经过Ni2+柱亲和层析、阴离子交换层析和分子筛层析纯化His-CSP目的蛋白，采用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化蛋白。结果 成功构建了His-CSP/pGAPZαA重组表达质粒，筛选到阳性His-CSP/pGAPZαA/GS115重组酵母菌，ELISA检测到表达上清中的His-CSP蛋白。层析纯化产物SDS-PAGE分析纯度>90%,Western blot分析显示纯化蛋白能被相应抗体识别。结论 在毕赤酵母中成功表达了His-CSP蛋白，并通过发酵和纯化得到高纯度His-CSP蛋白，为建立CSP的ELISA检测方法奠定了基础。

• 单位
  兰州生物制品研究所有限责任公司