昆虫杆状病毒系统表达人流感多表位基因盒的研究

作者：李凯; 丁焱; 庄忻雨; 田明尧; 曹亮; 朱光泽^*; 金宁一^*

来源：中国病原生物学杂志, 2023, 18(04): 390-394.

DOI：10.13350/j.cjpb.230404

• 流感病毒
• 重组杆状病毒
• 颈部区结构域
• 多重保守抗原
• 疫苗

目的 通过昆虫-杆状病毒表达系统表达人流感病毒多表位基因盒，为进一步研发通用型流感疫苗提供实验依据。方法 将甲型流感病毒H1N1颈部区(345aa-566aa)和H1/H3/B亚型HA2片段经4GS Linker串联M2e及ferritin蛋白构成的HA2-M2e-ferritin(简称HMf),参照A/Jilin/JYT-01/2018(H1N1)毒株的全基因组序列，将其HA2基因和HMf基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化合成，经两次双酶切后分别克隆至pFastBacTM双载体中。热激法将重组质粒转化入DH10BacTM大肠埃希菌感受态，含目的基因的pFastBacDual-HA2-HMf转移载体与DH10Bac的Bacmid质粒重组，构建重组转移质粒rBacmid-HA2-HMf。在脂质体介导下，用rB-HA2-HMf转染Sf9细胞进行重组杆状病毒的拯救。通过限制性酶双酶切、测序、重组Bacmid PCR、Western blot和间接免疫荧光法(IFA)鉴定目的蛋白的表达。用重组杆状病毒感染悬浮sf9细胞，收取细胞悬液，经超速离心、蔗糖密度梯度离心获得重组蛋白，利用透射电镜对重组蛋白进行观察分析。结果 HA2和HMf基因共表达，将HA2全长和HMf成功插入pFastBacTMDual双顺载体，包装并拯救出携带人流感多表位基因的重组杆状病毒rBDV-HA2-HMf。重组转移质粒pFastBacDual-HA2/HMf经限制性双酶切鉴定，重组穿梭质粒rBacmid-HA2/HMf经菌液PCR鉴定、杆状病毒共表达人流感多表位基因盒经Western blot和IFA鉴定成功，透射电镜下观察到重组蛋白形成的约20 nm的类病毒样颗粒。结论 成功构建重组杆状病毒，其表达的流感多重保守抗原具有反应原性，为进一步研发通用型流感疫苗奠定了实验依据。

• 单位
  长春中医药大学附属医院; 中国农业科学院; 吉林医药学院