传染性胰脏坏死病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作者：张文; 徐立蒲^*; 吕晓楠; 王小亮; 曹欢; 王姝; 王静波; 王澎

来源：中国动物检疫, 2023, 40(04): 106-113.

• 传染性胰脏坏死病毒
• 实时荧光定量RT-PCR
• TaqMan探针

传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)是一种严重危害鲑鳟鱼类的重要传染性病原。为建立IPNV快速检测方法，根据IPNV VP2蛋白编码基因保守序列，设计并筛选出特异性引物和Taq Man探针，并优化筛选引物以及探针检测浓度、退火温度和退火时间，建立了一种实时荧光定量RT-PCR检测方法，并对方法进行了评价。结果显示：该方法灵敏度高，对IPNV的检测限为5 copies/μL；特异性强，对传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒、病毒性出血性败血症病毒、草鱼呼肠孤病毒、流行性造血器官坏死病毒等其他病毒核酸扩增均呈阴性；重复性良好，组内与组间重复平均变异系数均小于3%；用本研究建立的实时荧光定量RT-PCR方法，对40份经病毒分离鉴定的样品进行IPNV检测，符合率为100%。结果表明，本研究建立的方法具有快速、特异、敏感等优点，可检测病毒含量较低的组织样品，对于IPNV的快速检测更具优势。