黄瓜绿斑驳花叶病毒SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法的建立

作者：田沂民; 吴建祥; 陈磊; 罗金燕; 滕凯; 叶军; 杜伟; 于翠^*

来源：农业生物技术学报, 2022, 30(08): 1640-1648.

DOI：10.3969/j.issn.1674-7968.2022.08.019

• 黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)
• SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR
• 种子
• 灵敏度
• 特异性

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)是我国重要的检疫性植物种传病毒，在世界各地均有发生，造成西瓜(Citrullus lanatus)、黄瓜(Cucumis sativus)、甜瓜(Cucumis melo)等作物的严重经济损失。CGMMV可由种子直接传播至下一代秧苗，为保障种子贸易顺利进行，有必要建立快速而准确的病毒检测方法。本研究以截获的带毒种子为材料，针对CGMMV建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法，其中设计筛选特异、灵敏的引物是关键。利用多次筛选得到的引物对建立了SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测方法，实验结果表明该方法能够特异地检测CGMMV，不与其他侵染葫芦科植物的病毒发生交叉反应；灵敏度是RT-PCR方法的1 000倍，是Taq Man探针实时荧光RT-PCR方法的100倍；且整个检测过程可在2.5 h内完成，是一种快速、灵敏、可靠的检测方法；应用该方法及Taq Man实时荧光RT-PCR方法同时对国内外198份种苗样品进行检测，结果显示kappa值大于0.82，说明两种方法具有高度一致性，本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR方法有效、可靠，为种子快速通关提供新的技术手段。

• 单位
  浙江大学; 广西壮族自治区农业技术推广总站