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摘要
目的构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的腺病毒系统,观察其在膀胱癌细胞中的表达。方法构建带有hTERT启动子的腺病毒穿梭载体pDC315-Tp-EGFP,细胞重组技术获得腺病毒Ad-hTERT-EGFP,按感染复数（MOI）100体外转染膀胱癌细胞株253J及人胚肺成纤维细胞株MRC-5,通过倒置荧光显微镜和RT-PCR分别检测EGFP的表达。带有小鼠巨细胞病毒（mCMV）启动子的腺病毒Ad-EGFP作为阳性对照。结果成功构建出重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP,滴度为3.8×1010空斑形成单位（pfu）/ml,Ad-hTERT-EG- FP感染的253J细胞中,（85.2±3.3）%发出明亮的绿色荧光;而其感染的MRC-5细胞未产生绿色荧光（P<0.01）;对照病毒Ad-EGFP在253J和MRC-5中分别有（87.1±2.2）%及（92.5±3.1）%的细胞可见到绿色荧光。RT-PCR检测显示:253J细胞转染Ad-hTERT-EGFP、Ad-EGFP后及MRC-5细胞转染Ad-EGFP后均有EGFP基因表达;而MRC-5细胞转染Ad-hTERT-EGFP后未见EGFP基因表达。结论该腺病毒系统中hTERT启动子调控下游基因可选择性地在膀胱肿瘤细胞中表达,在正常细胞中不表达,具有明显的靶向性。
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单位河北医科大学第二医院
