干扰和过表达BAMBI基因对猪卵泡颗粒细胞表型和功能的影响

作者：孙义姗; 杨飞; 黄涛^*

来源：中国畜牧兽医, 2021, 48(02): 563-573.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.02.018

• 猪
• 转化生长因子-β(TGF-β)
• BAMBI基因
• 颗粒细胞
• 干扰
• 过表达

为研究转化生长因子-β(TGF-β)信号通路中的骨形态发生蛋白和激活素膜结合抑制剂(bone morphogenetic protein and activin membrane-bound inhibitor,BAMBI)基因对猪卵泡颗粒细胞的调控作用,本研究设计构建BAMBI干扰和过表达载体,并将构建好的干扰(pSIREN-BAMBI-sh1、pSIREN-BAMBI-sh2、pSIREN-BAMBI-sh3)和过表达(pcDNA3.1-BAMBI)重组质粒转染猪卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR技术进行有效片段的筛选,并对TGF-β信号通路下游基因(TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、SMAD1、SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD5)和细胞凋亡基因(Bax、Bcl-2)mRNA的表达水平进行检测。最后,用MTT法和流式细胞术检测BAMBI干扰和过表达对卵泡颗粒细胞增殖及凋亡的影响。结果表明,BAMBI干扰和过表达载体成功构建,pSIREN-BAMBI-sh2抑制BAMBI表达的效果最好,干扰效率最高。干扰BAMBI时,TGF-βRⅡ表达量显著上升(P<0.05),使得SMAD2、SMAD3的表达量显著上升(P<0.05);过表达BAMBI时,TGF-βRⅡ表达显著下降(P<0.05),使得SMAD2、SMAD3的表达量显著下降(P<0.05);上调BAMBI可显著抑制猪卵泡颗粒细胞增殖,极显著促进猪卵泡颗粒细胞凋亡(P<0.01)。研究结果表明,BAMBI基因显著影响猪卵泡颗粒细胞的生长发育,可能通过调节TGF-β信号通路间接影响猪的繁殖性能。

• 单位
  动物科技学院; 石河子大学; 天康生物股份有限公司