新疆地区A型产气荚膜梭菌α毒素蛋白的原核表达

作者：苏燕; 苏艳^*

来源：甘肃畜牧兽医, 2021, 51(11): 52-55.

DOI：10.15979/j.cnki.cn62-1064/s.2021.11.014

• 产气荚膜梭菌
• α毒素蛋白
• 诱导
• 表达

目的:获取新疆地区魏氏梭菌的α毒素蛋白。方法:用新疆地区分离出的A型产气荚膜梭菌构建重组质粒pET30a-α,并将其转入大肠杆菌感受态细胞进行鉴定、表达,获得的可溶性蛋白经Ni柱纯化后,分别用SDS-PAGE和Western-Blot检测蛋白的纯度与反应原性。结果:显示诱导剂IPTG的浓度为0.5 mmol/L37℃诱导5 h时,蛋白的表达量最大,并筛选出了90 mM咪唑LE Buffer可以洗净杂蛋白,经透析、浓缩后获得了高纯度和高浓度的重组蛋白,且具有较好的反应原性。结论:α毒素蛋白以可溶形式高效表达,表达的α毒素蛋白为后期地区性疫苗的研究和产气荚膜梭菌毒素机理的研究奠定了基础。

• 单位
  新疆医科大学; 新疆农业大学