人乳头状瘤病毒E6和E7蛋白过表达慢病毒载体构建及稳定转染喉上皮细胞系的建立

作者：肖洋; 周思含; 牛子捷; 王军^*

来源：中国耳鼻咽喉头颈外科, 2022, 29(12): 790-794.

DOI：10.16066/j.1672-7002.2022.12.010

• 人乳头状瘤病毒6
• 人乳头状瘤病毒11
• 癌基因
• 慢病毒表达载体
• 稳定转染
• 喉上皮细胞系

目的 分别构建过表达人乳头状瘤病毒（human papillomavirus,HPV）6型和11型的E6、E7癌基因的慢病毒载体，建立HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的SNU-1076喉上皮细胞系模型。方法 分别合成表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的片段，构建重组慢病毒载体pHBLV-CMV-h-HPV6-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro和pHBLV-CMV-h-HPV11-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro。包装慢病毒后转染进入人喉上皮细胞系SNU-1076，经嘌呤霉素抗性筛选得到阳性克隆。采用实时定量PCR法分别检测HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的水平。结果通过测序验证质粒构建的成功。实时荧光定量PCR的结果显示，转染HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的SNU-1076细胞系相较于转染对照空载体的细胞系出现了明显的扩增曲线。其中HPV6-E6-E7的过表达效果为41 692倍，HPV11-E6-E7的过表达效果为124 957倍。结论 利用慢病毒法成功分别建立了过表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7的喉上皮SNU-1076细胞系。

• 单位
  首都医科大学附属北京同仁医院; 首都医科大学