重组截短型TGF-β前体潜在相关肽的原核表达及其对HSC-T6细胞增殖的影响

作者：石永萍; 郑俊雅; 刘增瑞; 李鲁新; 王晶; 李玲玉; 曹雅男; 初彦辉

来源：中国当代医药, 2018, 25(17): 4-7.

• TGF-β前体潜在相关肽
• 原核表达
• 蛋白纯化
• HSC-T6
• 增殖

目的初步研究截短型TGF-β前体潜在相关肽(LAP)的重组蛋白对HSC-T6细胞增殖的影响。方法PCR扩增截短型LAP片段,构建该片段的原核表达载体,经双酶切、DNA测序鉴定后,IPTG 0.5 mmol/L,37℃,4 h诱导出蛋白的大量表达,表达的蛋白经SDS-PAGE,Western blot检测,经镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,将重组蛋白作用于大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6),用MTT法检测不同浓度重组蛋白对细胞增殖作用的影响。结果原核表达载体构建成功,成功表达、纯化了重组蛋白,且HSC-T6细胞的增殖程度随重组蛋白浓度的增加而降低。结论重组蛋白可抑制HSC-T6细胞的增殖,为后续研究LAP片段对TGF-β活化过程的干扰作用及对器官纤维化的影响奠定基础。

• 单位
  牡丹江医学院