含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建

作者：于学东; 秦成峰; 姜涛; 陈水平; 邓永强; 刘然; 赵慧; 李晓峰; 朱武洋; 于曼; 秦鄂德

来源：军事医学科学院院刊, 2008, 32(02): 101-105.

DOI：10.3969/j.issn.1674-9960.2008.02.001

• 登革病毒
• 复制子
• 海肾萤光素酶 dengue virus
• replicon
• Renilla luciferase

目的:构建含有海肾萤光素酶(Renilla luciferase,R.luc)报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子,为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段。方法:利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子(DENRP),用顺式水解酶元件(cis-acting hydrolase element,CHYSEL)技术将R.luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区,构建含有R.luc报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)。将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光、RT-PC...

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院