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摘要
为研发非洲猪瘟病毒的免疫检测试剂提供素材，制备非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体。采用PCR方法扩增K205R基因，构建重组表达质粒pET-30a-K205R,将重组质粒pET-30a-K205R转化到大肠埃希氏菌BL21 (DE3)中并通过IPTG诱导表达ASFV K205R蛋白。将纯化出的蛋白乳化后免疫小鼠，采用杂交瘤技术制备能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。将筛选出来的单克隆细胞注射至小鼠腹腔中，待小鼠腹部膨大时收集腹水，通过ELISA方法鉴定腹水效价、Western blot和IFA鉴定单克隆抗体特异性及反应原性，并对单克隆抗体亚型进行鉴定。经SDS-PAGE鉴定，重组ASFV K205R蛋白成功表达。Western blot分析显示，His标签抗体能够特异性识别重组表达的ASFV K205R蛋白，表明其具有良好的特异性以及反应原性。通过细胞融合和细胞筛选得到1株能稳定分泌抗ASFV K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，将其命名为1C3G6。ELISA检测腹水中抗体效价为1∶100 000。Western blot和IFA鉴定结果显示单克隆抗体1C3G6与K205R蛋白反应性良好。通过亚型鉴定，单克隆抗体1C3G6的重链为IgG2b类，轻链为Kappa型。经Western blot和IFA鉴定，筛选得到的1C3G6单克隆抗体可以特异性识别原核系统和真核系统表达的K205R蛋白，说明该抗体具有良好的特异性。
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