过氧化氢诱导慢性氧化应激参与小胶质细胞衰老的作用及机制

作者：李红艳; 毛安琼; 刘婷; 彭**; 张敏; 张英^*

来源：华西医学, 2023, 38(08): 1188-1194.

• 衰老
• 小胶质细胞
• 过氧化氢
• 神经退行性疾病
• 细胞衰老

目的 探索过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2)诱导慢性氧化应激在小胶质细胞衰老中的作用。方法 选择购自ATCC的10代以内BV2小胶质细胞，采用0、50、100、200μmol/L不同浓度的H2O2处理BV2小胶质细胞。根据H2O2使用浓度将其分为对照组、H2O2-50μmol/L组、H2O2-100μmol/L组、H2O2-200μmol/L组。应用CCK8细胞增殖实验测定细胞增殖，通过衰老相关β半乳糖苷酶(senescence associated β galactosidase, SA-β-gal)染色实验和实时荧光定量聚合酶链反应检测衰老相关周期蛋白分子p16、p21、p53及衰老相关分泌表型基因[白细胞介素-1β(interleukin-1 beta, IL-1β)、转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9, MMP9)]的表达变化来测定细胞衰老。结果 在诱导过程中，H2O2-200μmol/L对BV2小胶质细胞损伤较大，因此未进行后续检测。最终收集对照组、H2O2-50μmol/L组和H2O2-100μmol/L组细胞。对照组、H2O2-50μmol/L组、H2O2-100μmol/L组的细胞存活率(F=46.176,P<0.001)、SA-β-gal染色阳性率(F=553.1,P<0.001)比较，差异均有统计学意义。H2O2-50μmol/L组细胞存活率无明显改变(P>0.05),H2O2-100μmol/L组细胞存活率明显下降(P<0.001)。H2O2-50μmol/L组、H2O2-100μmol/L组细胞SA-β-gal染色阳性率均升高(P<0.001)，且H2O2-100μmol/L组SA-β-gal染色阳性率高于H2O2-50μmol/L组(P<0.001)。在50、100μmol/L H2O2诱导下，p16、p21、p53的mRNA水平均升高(P<0.05),IL-1B、TGF-β、MMP9 mRNA均上调(P <0.05)，且H2O2-100μmol/L组更明显(P <0.05)。结论 使用100μmol/L H2O2诱导8 d可成功建立BV2小胶质细胞衰老模型，其机制可能与促进p16、p21、p53、IL-1β、TGF-β、MMP9分泌有关。

• 单位
  西南医科大学; 自贡市第一人民医院